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- 产品名称： E. coli DNA Ligase
- 产品货号： CSCE1107
- 货期： 现货
- 价格与订购： 600
- 数量：
库存： 100
- 规格： 200U
- 产品信息
- 如何订购
产品概述
E.coli DNA Ligase是以NAD+为辅助因子的酶，可催化双链DNA互补的3'-羟基和5'-磷酸末端之间形成磷酸二酯键，最适用于粘性末端的双
链DNA的连接，但不能有效连接平末端底物。该酶可以热灭活，在一定温度范围内 (4℃ - 37℃) 都有活性。
产品组分
| 组 分 | CSCE1107 (200 U) |
| E.coli DNA Ligase (10 U/μl)a | 20 μl |
| 10X E. coli DNA Ligase Buffer | 500ul |
a.贮存于10 mM Tris-HCl pH 7.4，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，200 µg/ml BSA，50% 甘油中。
保存条件
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
适用范围
1. 双链DNA的分子粘性末端克隆。
2. 平末端连接，需要有10％-15％PEG和高浓度的一价阳离子的存在。
3.cDNA第二条链合成产物的cDNA克隆。
单位定义
一个单位的DNA连接酶被定义为在标准条件下，16℃ 30分钟内连接hindⅢ消化的λ噬菌体DNA（5'末端的DNA为0.12μM，300μg/ ml的浓度）（> 50％）所需要的酶量。
反应过程
将最终浓度为0.12 μM的DNA与适量单位的E.coli DNA ligase在20-50μL1X E. coli DNA Ligase Buffer中16℃孵育过夜。
热灭活条件
65℃加热20分钟。
质量控制
1.核酸外切酶活性：未检测出污染DNA外切和内切核酸酶，核糖核酸酶活性。
2.活性检测：将20U的E.coli DNA ligase与1μg经HindIII消化过的DNA在50 μL 1X E.coli DNA Ligase Buffer中37℃孵育16小时，在琼脂糖凝胶上形成正常且清晰的条带。
注意事项
1. 需要NAD+（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）作为辅助因子，与使用rATP的其他连接酶不同。
2. 平末端片段的连接效率极低。对于平末端片段的连接，使用T4 DNA Ligase。
3. 不能将RNA连接到DNA。
4. 该酶只连接具有粘性末端的DNA片段。
Note
For research use only .
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